N末端タグ用 2nd PCRプライマーの設計

 

2nd PCRプライマーは、ORFに依存しない設計ですので、下記のプライマーは、N末端タグ用 1st PCR の産物に対して、ユニバーサルにご利用できます。

挿入するタグが下表にある場合、特に設計・サイクル検討する必要はありません。４種類のプライマーが必要になります。

各種プリマ―濃度は、下図の通りですが、10 μMと 100 nM の２種類ありますので、調製時はご注意ください。

 

Forward Primer NF2 ( 10 μM )

Primer name	Primer sequence 5′ to 3′
2nd_NF2	CCCGCGAAATTAATACGACTCACTATAG

 

Forward Primer NF1 ( 100 nM )

Primer name	Primer sequence 5′ to 3′
2nd_no-tag_NF1	CCCGCGAAAT TAATACGACT CACTATAG
2nd_His_NF1	CGACTCACTA TAGGGCTCAC CTATCTCTCT ACACAAAACA TTTCCCTACA TACAACTTTC AACTTCCTAT TATGCATCAT CATCATCATC ATCTCCAGCA GGGAGGTACTA TG
2nd_FLAG_NF1	CGACTCACTA TAGGGCTCAC CTATCTCTCT ACACAAAACA TTTCCCTACA TACAACTTTC AACTTCCTAT TATGGACTAC AAGGATGACG ATGACAAGCT CCAGCAGGGA GGTACTATG
2nd_HA_NF1	CGACTCACTA TAGGGCTCAC CTATCTCTCT ACACAAAACA TTTCCCTACA TACAACTTTC AACTTCCTAT TATGTATCCT TATGACGTGC CTGACTATGC CCTCCAGCAG GGAGGTACTA TG
2nd_strepⅡ_NF1	CGACTCACTA TAGGGCTCAC CTATCTCTCT ACACAAAACA TTTCCCTACA TACAACTTTC AACTTCCTAT TATGTGGTCC CACCCTCAAT TCGAGAAGCT CCAGCAGGGA GGTACTATG
2nd_XXX-tag_NF1*	CGACTCACTA TAGGGCTCAC CTATCTCTCTA CACAAAACAT TTCCCTACAT ACAACTTTCA ACTTCCTATT ATG NNN—NNN  CTCCAGCAGG GAGGTACTAT G

＊任意のタグを挿入する場合 2nd_XXX-tag_NF1の NNN—NNN 部分を変更してください。

 

Reverse Primer NR1 ( 100 nM )

Primer name	Primer sequence 5′ to 3′
2nd_NR1	CCCTCGAAGGATCAGGCCCTTATGGCCGGATCCAA

 

Reverse Primer NCR2 ( 10 μM )  : C末端用と共通です

Primer name	Primer sequence 5′ to 3′
2nd_NCR2	GGCCCCCCCTCGAAGG