C末端タグ用 2nd PCRプライマーの設計
2nd PCRプライマーは、ORFに依存しない設計ですので、下記のプライマーは、C末端タグ用 1st PCR の産物に対して、ユニバーサルにご利用できます。
挿入するタグが下表にある場合、特に設計・サイクル検討する必要はありません。3種類のプライマーが必要になります。
各種プリマ―濃度は、下図の通りですが、10 μMと 100 nM の２種類ありますので、調製時はご注意ください。
Forward Primer CF1 ( 10 μM )
| Primer name | Primer sequence 5′ to 3′ |
| 2nd_CF1 | CCCGCGAAAT TAATACGACT CACTATAGGG CTCACCTATC TCTCTACACA AAACATTTCC |
Forward Primer CR1 ( 100 nM )
| Primer name | Primer sequence 5′ to 3′ |
| 2nd_His_CR1 | CCCTCGAAGG ATCAGGCCCT TATGGCCGGA TCCAAGAGCT CTTTTTTTTT TTTAATGATG ATGATGATGA TGAGTACCTC CCTGCTGG |
| 2nd_FLAG_CR1 | CCCTCGAAGG ATCAGGCCCT TATGGCCGGA TCCAAGAGCT CTTTTTTTTT TTTACTTGTC ATCGTCATCC TTGTAGTCAG TACCTCCCTG CTGG |
| 2nd_HA_CR1 | CCCTCGAAGG ATCAGGCCCT TATGGCCGGA TCCAAGAGCT CTTTTTTTTT TTTAGGCATA GTCAGGCACG TCATAAGGAT AAGTACCTCC CTGCTGG |
| 2nd_strepⅡ_CR1 | CCCTCGAAGG ATCAGGCCCT TATGGCCGGA TCCAAGAGCT CTTTTTTTTT TTTACTTCTC GAATTGAGGG TGGGACCAAG TACCTCCCTG CTGG |
| 2nd_XXX-tag_CR1* | CCCTCGAAGG ATCAGGCCCT TATGGCCGGA TCCAAGAGCT CTTTTTTTTT TTTA RRR—RRR AGTACCTCCC TGCTGG |
＊任意のタグを挿入する場合 2nd_XXX-tag_CR1の RRR—RRR 部分を変更してください。
Reverse Primer NCR2 ( 10 μM ) : C末端用と共通です
| Primer name | Primer sequence 5′ to 3′ |
| 2nd_NCR2 | GGCCCCCCCTCGAAGG |