技術

技術概要

製品のコア技術は3つあります。mRNA鋳型作成系,コムギ胚芽抽出液および簡便な発現方法です。

  1. 鋳型作成系:
    鋳型作成系では、mRNAを安定して合成するために従来3’UTR側の配列が1200bp程度必要とされていましたが、ポリAを含む50bp程度の配列で従来同様機能することが発見されました。この配列をORFの3’UTR側に付与することで、C末端へのタグ付けもPCRで可能となりクローニングが不要となりました。トランケーションのサブクローニングも不要で、様々なドメインのタンパク質を非常に簡便に、汎用的かつ網羅的に作成できるようになりました。
  2. 翻訳系:
    コムギ胚芽由来の翻訳液の最適化により、従来困難であった、膜タンパク質も合成が可能になり、可溶化タンパク質のほぼ全てと、膜タンパク質の合成が可能となりました。特に膜タンパク質の発現には、人工リポソームの添加は不要です。膜タンパク質の細胞膜貫通部分にはコムギ胚芽由来の脂質(膜断片)が吸着しており、可溶化発現します。
  3. 簡便な発現方法:
    翻訳反応に調製するアミノ酸は析出の懸念がありましたが、特殊な技術により20種のアミノ酸が高濃度の1液になっています。従って、翻訳反応液の調製は、提供のコムギ胚芽抽出液とアミノ酸ミックスを混合するだけです。また、翻訳反応は、そこに転写反応で得たmRNAを投入しインキュベートするだけの簡便な混合法がご利用頂けます。サポートページに調製工程を含めた手技動画を掲載していますので、ご参考ください。

これら3つの全く新しい技術により、従来は合成が困難であった次のようなタンパク質が簡便に合成できるようになっています。

リン酸化酵素の発現例

これまで合成が困難であったヒトや植物の免疫反応に関与する重要なリン酸化酵素も活性をもって合成できています。

転写因子、受容体の発現例

光に応答して活性が変化する受容体タンパク質や、疾病応答に重要な転写因子等も活性をもって合成できています。

細胞膜貫通型受容体キナーゼの発現例

細胞膜貫通型の受容体キナーゼも合成できています。

多剤排出輸送体の発現例

生物界に普遍的に存在し、特に哺乳類においては薬剤を排出する重要なトランスポーターが、容易に合成できています。

関連論文

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