PCR産物が少ない

PCR産物が少ない

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全く検出できない、何もない場合

プライマー、試薬類の確認を行ってください
(例:mRNAの染色度が高い EtBr を使っているかどうか)

 

1st PCR産物がわずかに確認できる場合

  • 伸長反応時間を長くする
    1st PCRの伸長反応時間は30 sec/kb を推奨していますが、増幅効率が悪い場合は 1 min/kb にしてください。1 kbp までの DNA に対しては 1 min の伸長反応時間が確実です。
  • サイクル数を35に増やす

 

2nd PCR産物がわずかに確認できる場合

  • 伸長反応時間を2および3セグともに1stと同じにする
  • 3セグのサイクル数を 35 – 40 にする